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      關于實驗中抗體的常見問題及解決方法

      更新時間:2023-06-07   點擊次數:244次

      問題

      原因

      解決方案

      邊緣效應

      組織邊緣貼附不牢,邊緣組織松脫漂浮于液體中

      APES/多聚賴氨酸處理玻片;組織切片盡量??;盡量避免選用壞死較多的組織


      試劑未充分覆蓋組織

      滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織

      非特異性染色體

      抗體質量問題

      使用質量有保證的抗體


      抗體孵育時間長

      減少孵育時間


      抗體濃度過高

      降低抗體濃度


      一抗為多抗

      使用單克隆抗體


      內源性過氧化物酶及biotin

      延長滅活時間


      封閉不足

      延長封閉時間


      DAB孵育時間過久或濃度過高

      按說明書配置試劑,鏡下控制反應時間


      抗體孵育后洗滌不充分

      每次孵育之后洗3*5次


      滴加試劑時干片

      及時滴加試劑


      切片在緩沖液中浸泡過久

      抗原修復之后及時封閉加一抗,不能過夜

      陰性結果

      抗體濃度及質量

      選擇有質量保證的抗體,先做預實驗摸索抗體使用濃度


      抗原修復不全

      摸索合適的抗原修復方式及修復時間


      抗原豐度

      正常陰性


      封閉時間過長

      減少封閉時間


      DAB孵育時間短

      鏡下控制顯色時間


      細胞通透不全,抗體未能進入細胞反應

      選擇合適的通透劑及其反應時間


      一抗二抗不匹配

      選擇正確來源的二抗

      脫片

      玻片未處理好

      玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理


      切片厚薄不均勻

      更換刀片;調整好切片機狀態


      烤片時間或溫度不夠

      60攝食度2小時


      組織自身問題

      腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片


      抗原修復時溫度迅速變化

      抗原修復后讓其自然冷卻


      操作時用力過猛

      有脫片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水紙吸干殘余液體

      染色弱

      抗體濃度低,孵育時間短

      提高抗體濃度,延長反應時間


      試劑使用超過有效期

      試劑定時更新


      滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋

      滴加試劑前盡量減少殘余液體


      封閉過度

      減少封閉時間

      著色不均勻

      切片厚度不一致

      更換刀片;調整好切片機狀態


      試劑配制未混勻使局部濃度不一致

      試劑充分混勻后滴加


      試劑未完整覆蓋組織

      滴加試劑時讓試劑完整覆蓋組織


      脫蠟不完整

      更換脫蠟劑或延長脫蠟時間


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